Turbo-charged Crispr gene-editor can make 25 alterations in one go — ABC Chemicals


Была разработана усовершенствованная методика редактирования генов Crispr, которая может вводить до 25 различных регуляторных изменений или изменений в ген одновременно.

Изначально идентифицированная как примитивный иммунный ответ у бактерий, система Crispr в настоящее время является популярным инструментом для целенаправленного редактирования генов в клетках млекопитающих. Техника включает введение плазмид, которые кодируют различные компоненты Crispr, в клетку-мишень, включая последовательности для белков Cas и gRNAs, которые направляют белки к нужным генам. Таким образом, исследователи смогли выполнить направленный нокаут гена, активацию гена и репрессию гена с минимальными эффектами от цели.

Ранее, однако, белки и гРНК Cas должны были быть закодированы на отдельных транскриптах перед их введением в клетки-мишени, ограничивая нашу способность нацеливаться на несколько генов одновременно. Теперь команда исследователей показала, что с помощью третичного структурного мотива можно стабилизировать транскрипт РНК, кодирующий белок Cas12a и до 25 отдельных последовательностей рРНК в одной плазмиде. Новая структура также стимулировала производство Cas12a и улучшенную обработку gRNA.

Поскольку средняя длина транскриптов млекопитающих составляет 13,5 кб, ученые предположили, что возможно использование сотен или даже тысяч гРНК параллельно с использованием отдельных плазмид. Однако они признают, что по мере увеличения длины стенограмм проблемы, связанные с их синтезом и клонированием, станут более значительными.

Этот новый подход к кодированию компонентов Crispr имеет как преимущества, так и недостатки по сравнению с более традиционными методами. Одним из наиболее важных отличий является то, что когда белки Cas и гРНК вводятся раздельно, они экспрессируются разными промоторами. И наоборот, когда они оба являются частью одной и той же плазмиды, оба компонента экспрессируются одним промотором и, следовательно, имеют фиксированное отношение друг к другу. Это обеспечивает более жесткий контроль над выражением, но может также привести к фиксированному соотношению, которое не оптимизировано для рассматриваемой ситуации, что приведет к снижению активности.

Такие проблемы могут быть преодолены путем увеличения концентрации плазмиды или путем кодирования множества рРНК на ген-мишень, но это не было подтверждено.







Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *