UV can introduce oxidation artefacts during protein purity tests — ABC Chemicals


Было обнаружено, что методика, обычно используемая для анализа белков, представляет собой артефакты. Ученые из британского фармацевтического гиганта AstraZeneca обнаружили, что высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в сочетании с ультрафиолетовой и масс-спектроскопией (МС), которая используется для оценки чистоты активных лекарственных соединений, таких как белки или олигонуклеотиды, вызывает окислительные примеси.

«Мы сделали открытие, когда анализируемый нами белок, по-видимому, содержал высокие уровни окислительных примесей», — говорит исследователь Фриц Швайкарт, исследователь AstraZeneca. «После его изучения он оказался результатом УФ-детекторов».

ВЭЖХ-УФ-МС может регистрировать количество соединения, измеряя его поглощение УФ-света, в то время как структурные характеристики определяются масс-спектроскопией. Тем не менее, исследование Schweikart показывает, что современная технология УФ-детектирования может быть источником серьезных окислительных артефактов.

Сабет Верпорт, профессор фармацевтического анализа в Гронингенском научно-исследовательском фармацевтическом институте в Нидерландах, говорит, что это важный вывод, потому что «окислительные эффекты возникают в образцах белков и пептидов — типы образцов, для которых часто используется МС». Она добавляет, что исследователям по-прежнему необходимо знать основные принципы измерений — «мы не находимся в той точке, где мы можем рассматривать эти приборы как черные ящики».

Работа Schweikart показывает, что соединения, чувствительные к ультрафиолетовому разложению, разлагаются при высоких концентрациях при использовании этого метода, в то время как соединения, устойчивые к ультрафиолетовому излучению, но чувствительные к деградации, вызванной свободными радикалами, также затрагиваются. Эта последняя группа включает в себя пептиды, белки, олигонуклеотиды и малые молекулы, и «для нас это было большим сюрпризом, поскольку деградация от свободных радикалов в подвижной фазе, сформированной в УФ-детекторе, никогда ранее не описывалась и не предупреждалась», объясняет Швейкарт. ,

Исследователи, использующие ВЭЖХ-УФ-МС, должны знать об эффектах окисления и повторно исследовать образцы с выключенной УФ-лампой, если наблюдаются загрязнения, предупреждает Швайкарт. Он также предлагает соединить ультрафиолетовую и масс-спектроскопию параллельно, а не последовательно.

Хотя эти результаты важны, они не вызывают серьезных сомнений в надежности техники. По мнению Verpoorte, «исследователи, использующие эту технологию, могут получить дополнительную информацию для интерпретации результатов, для которых у них ранее не было хорошего объяснения».

Швейкарт считает, что их открытие — это возможность. «Мы рассматриваем это как новую захватывающую возможность изучения радикальной химии», — говорит он. «Пока сообщество MS знает об этом эффекте, это просто еще одна возможность поиграть».







Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *